Experimento #6

Experimento 6.

Actividad Enzimática de la Ureasa

         Objetivos:

• Al finalizar el experimento el estudiante estará en capacidad de:

•     Determinar la actividad enzimática de la Ureasa presente en la harina de soya.
•    Calcular la Km. de la enzima de los datos de actividad enzimática, frente a diferentes concentraciones de sustrato.

 Marco Teórico:

Las enzimas son moléculas de proteínas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones químicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la energía de activación, propia de las reacciones.  Se entiende por energía de activación al valor de la energía que es necesario aplicar (en forma de calor, electricidad o radiación) para que dos moléculas determinadas colisionen y se produzca una reacción química entre ellas.

Características de la acción enzimática:

1-    Especificidad de Sustrato: El sustrato es la molécula sobre la que la enzima ejerce su acción catalítica.

2-    Especificidad de acción: Cada reacción esta catalizada por una enzima específica.

La acción Enzimática se caracteriza por la formación de un complejo que representa el estado de transición.

E  +  S                 ES               E  + P

El sustito se une a la enzima a través de numerosas interacciones débiles como son: puentes de hidrogeno, electrostáticas, hidrófobas, etc., en un lugar especifico, el centro activo.  Este centro es una pequeña porción del la enzima constituido por una serie de animoácidos que interaccionan con el sustrato.

La Ureasa es una enzima que convierte la urea en amoniaco a pH neutro y se puede obtener de fuentes vegetales, específicamente de la harina de frijol de soya.  Participa en el  metabolismo del nitrógeno en plantas. Estas enzimas permiten el estudio de nitrógeno ureico presente en el plasma humano.

En el estudio de la actividad enzimática de la ureasa, se titula el amoníaco formado con ácido clorhídrico valorado y se reporta al actividad enzimática en  moles de producto formado por minuto.  Se verifican las siguientes reacciones.

                               Ureasa

 (NH2)2CO                                               2NH3      +      CO2

   Urea                                                 Amoniaco

NH3     +    H2O                                     NH4 OH

NH4OH  +  HCl                                        NH4Cl   +      H2O

Materiales y Reactivos.

 Urea 0.25 M

LIMITE DE EXPOSICION PERMITIDO:  NO ESTABLECIDO

SINTOMAS Y SIGNOS DE LA EXPOSICION:

PIEL: PUEDE CAUSAR IRRITACION EN CONTACTO PROLONGADO.

OJOS:  PUEDE CAUSAR IRRITACION .

INHLACION:  LA  INHALACION  REPETIDA Y PROLONGADA PUEDE CONDUCIR A IRRITACION RESPIRATORIA.

INGESTION: MUY BAJA TOXICIDAD POR INGESTION.    

Amortiguador: KH2PO4

nhalación: Causa irritación de nariz y tracto respiratorio superior, tos, laringitis, dolor de cabeza, náusea y 

vómito. La muerte puede  presentarse por inflamación, edema o espasmo de la laringe y bronquios, edema

pulmonar o neumonitis química. 

Contacto con ojos: Tanto en formas de cristales como en disolución, este compuesto es muy corrosivo. 

Contacto con la piel:  La irrita y en casos severos causa quemaduras químicas. 

Ingestión: Se ha observado en humanos que una ingestión de 2400 µg/Kg/día (dosis bajas o moderadas) 

genera quemaduras en tráquea y efectos gastrointestinales como náusea, vómito, ulceración, diarrea o 

constipación y pérdida de conciencia

 HCl 0.2 M,

 Inhalación:  Apartar al sujeto lo antes posible de la zona contaminada, transportarlo estirado, con el tronco elevado, a un lugar tranquilo, fresco y bien aireado. Reanimación respiratoria u oxígeno si fuera necesario. Evitar el enfriamiento (taparlo con una manta)Contacto con la piel:  Sin perder tiempo, llevar al sujeto completamente vestido bajo la ducha. Retirar 

los zapatos, los calcetines, la ropa manchada, lavar la piel alcanzada con agua corriente. Médico de urgencia en todos los casos. Evitar enfriamiento (taparlo con una manta), procurar ropas limpias. 

Puede efectuarse un lavado posterior con solución de bicarbonato sódico. 

Contacto con los ojos:  Oftalmólogo de urgencia en todos los casos. Prever un transporte urgente hacia un centro hospitalario. Sin perder tiempo, enjuagar los ojos con agua corriente durante 15 minutos, manteniendo los párpados ampliamente abiertos. Administrar  un colirio analgésico (oxibuprocaína) en caso de dificultad en abrir los párpados.

 azul de timol. 

- RIESGOS PARA LA SALUD
VÍAS DE ENTRADA SÍNTOMAS DEL LESIONADO PRIMEROS AUXILIOS
 INGESTIÓN ACCIDENTAL Puede provocar irritacion gastrointestinal De a beber inmediatamente agua o leche.vomito, diarrea y nauseas. Nunca de nada por la boca a una persona que se encuentre inconsciente.
CONTACTO CON LOS OJOS Irritación y ardor en los ojos. Lavar suavemente con agua corriente durante 15 min. abriendo ocasionalmente los párpados.
 CONTACTO CON LA PIEL Irritación y enrojecimiento de la piel. Lavar con agua corriente durante 15 min. al mismo tiempo quitarse la ropa contaminada y calzado. 
ABSORCIÓN No identificado No se dispone de información
 INHALACIÓN Irritación en las vías tractorespiratorias Traslade a un lugar con ventilación adecuada,Puede causar metemoglobinemia, cyanosis Si respira con dificultad suministrar oxigeno.taquicardia y en casos extremos la muerte. Solicite atención medica de inmediato

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