Experimento 3.

Pruebas Cualitativas para aminoácidos y proteínas

Objetivos:

1.    Aplicar pruebas cualitativas generales y específicas que permitan reconocer grupos químicos de los aminoácidos y proteínas.

2.    Someter soluciones de proteínas a desnaturalización con agentes físicos y químicos.

Marco Teórico:

1. Reacción con la ninhidrina: Los grupos amino libres de los aminoácidos, de los péptidos y las proteínas reaccionan con la ninhidrina a un pH entre 4 y 8, para dar un compuesto de intenso color azul púrpura.  La prueba también es positiva con aminas primarias y amoníaco pero sin desprendimiento de CO₂ .  Los aminoácidos prolina e hidroxiprolina dan un color amarillo en lugar del color púrpura con la ninhidrina.

             La reacción es muy sensible y es ideal para la detección de aminoácidos en cromatogramas y para su cuantificación mediante técnicas espectrofotométricas de las fracciones que se obtienen de  columnas cromatográficas.

2. Reacción xantoproteica: Los aa, que contienen un núcleo aromático forman nitroderivados de color amarillo cuando se calientan con ácido nítrico concentrado.   Las sales de estos derivados son de color naranja intenso en medio alcalino.  La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el Triptófano, así como todas las proteínas que los contienen, dan positiva la prueba.

3. Reacción del ácido glioxílico para triptófano: El grupo indólico del triptófano reacciona con ácido glioxílico en presencia de ácido sulfúrico concentrado dando un complejo de color púrpura.  El ácido acético glacial que ha sido expuesto a la luz contiene ácido glioxílico.

4. Reacción para el triptófano: Este aminoácido se condensa fácilmente con varios aldehídos en presencia de ácidos fuertes para dar compuestos coloreados.  En la reacción se utiliza el reactivo de Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldehído al 10% en HCL conc.) que reacciona con un buen número de compuestos orgánicos tales como indoles, aminas aromáticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados.

5. Reacciones para cisteína y cistina: Cuando los aa y las proteínas que contienen grupos tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros.  Este sulfuro puede detectarse por la formación de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adición de acetato de plomo.

Los grupos tioles también reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amoníaco para dar un complejo de color rojo.

6. Prueba para Arginina: El aa. Arginina contiene un grupo guanidino en la cadena lateral, este grupo reacciona con el reactivo de Sakaguchi (a-naftol/agua de Bromo) en medio alcalino para dar un compuesto de color rojo.

. Materiales y Reactivos.

 

gotero

gradilla

Baño maría

HCl



Inhalación: En el caso de exposiciones agudas, los mayores efectos se limitan al tracto respiratorio 
superior.  
Contacto con ojos: Este ácido es un irritante severo de los ojos y su contacto con ellos puede causar 
quemaduras, reducir la visión o, incluso,  la pérdida total de ésta. 
Contacto con la piel: En forma de vapor o disoluciones concentradas causa quemaduras serias, 
dermatitis y fotosensibilización. 


Glicina

Contacto con los ojos:   Enjuague los ojos con agua.  Llame al médico si aparece irritación.   

Contacto con la Piel:   Lave la piel con agua abundante.
Ingestión:   Dé a beber agua en abundancia.  Llame al médico inmediatamente.
Inhalación:   No es requerido.










Tirosina
 Instrucciones generales: No se precisan medidas especiales.
· En caso de inhalación del producto: Suministrar aire fresco. En caso de trastornos, consultar al médico.
· En caso de contacto con la piel: Por regla general, el producto no irrita la piel.
· En caso de con los ojos: Limpiar los ojos abiertos durante varios minutos con agua corriente.
· En caso de ingestión: Consultar un médico si algunos trastornos persisten


                        Triptófano

· en la piel: No produce irritaciones.

· en el ojo: No produce fuertes irritaciones.

· Ingestión: Puede ser nocivo por ingestión.

· Sensibilización: No se conoce ningún efecto sensibilizan.

Cisteína

Medio de contaminación   Por ingestión 

Carcinogénico    No

Cistina

 inhalación : Suministrar aire fresco. En caso de trastornos, consultar al médico.

·  piel:

Lavar la piel con abundante agua y jabón durante un mínimo de 15 minutos.

· ojos: Limpiar los ojos abiertos durante varios minutos con agua corriente.

·  ingestión: Consultar inmediatamente un médico.

Prolina

 inhalación: Suministrar aire fresco. En caso de trastornos, consultar al médico.

·  piel: Por regla general, el producto no irrita la piel.

·  ojos: Limpiar los ojos abiertos durante varios minutos con agua corriente.

 ingestión: Consultar un médico si algunos trastornos persisten.

Hidroxiprolina

 toxicidad : No tóxico 

piel: Lavar con agua. 

ojos: Lavar con abundante agua. 

ingestión

 Dar a beber el agua que desee.  Avisar al médico. Servicio de 

información Toxicidad. 915620420

Arginina

 piel: lavar la piel con abundante agua y jabón durante  un mínimo de 15 minutos.

·  ojos:Limpiar los ojos abiertos durante varios minutos con agua corriente. En caso de trastornos persistentes

·  ingestión:Lavar la boca con agua si el sujeto está consciente.

No provocar el vómito y solicitar asistencia médica inmediata.

Fenilalanina

Ojos lavar con abundante agua mantener los parpados abiertos,

Albumína

Ojos: gafas de seguridad con protección lateral reguladas por la normativa EN 166.

Piel: elegir la protección corporal de acuerdo con la cantidad y la concentración de la sustancia 

peligrosa en el área de trabajo. 

Vías respiratorias:  utilizar mascarillas de los tipos N95 (US) o P1 (EN 143) cuando sea 

necesario. 

Manos:  utilizar guantes para el manejo de esta sustancia. 










Caseína

 ojos, lavar inmediatamente con agua abundante y consultar a un especialista. 

HNO3

PIEL  Corrosivo, enrojecimiento, dolor, quemadura química. Causa dolor y quemaduras 

severas.  

INGESTIÓN  Corrosivo, ardor de garganta, dolor de estómago.  Causa dolor y quemaduras en la 

OJOS  Corrosivo, enrojecimiento, dolor, visión borrosa.  

INHALACIÓN

  Corrosivo.  Pungente, tos, ardor de garganta, paro respiratorio, asma ocupacional.  

NaOH

Inhalación: La inhalación de polvo o neblina causa irritación y daño del tracto respiratorio. En caso de e
xposición a concentraciones altas, se presenta ulceras nasal.

 piel: Tanto el NaOH sólido, como en disoluciones concentradas es altamente corrosivo en la piel.

Acetato Glacial

inhalación

La exposición al polvo generado durante el manejo o el corte del producto, especialmente con herramientas eléctricas

, puede irritar los ojos ,piel, la nariz, la garganta y el tracto respiratorio.

ojos:El polvo o el contacto directo pueden causar irritación mecánica de los ojos

piel: El contacto directo con la piel puede causar irritación y comezón temporales.

Acetato de plomo

·  inhalación : Suministrar aire fresco. 

· piel: En caso de irritaciones continuas de la piel, consultar un médico.

·  ojos: Limpiar los ojos abiertos durante varios minutos con agua corriente.

·  ingestión: Consultar un médico si algunos trastornos persisten.

Diseño Experimental.


   Reacción de la  ninhidrina:

Reacción xantoproteica

Prueba del ácido glioxílico

 Prueba de Ehrlich para triptófano

  
Reacciones para cisteína y cistina

Reacción para la arginina

Ensayo de Biureth para proteínas

    Desnaturalización por calor y pH extremo

 Precipitación con cationes de metales pesados 

Nota: estas soluciones son tóxicas, no las descarte en las tinas de desagüe.

A 2mL de la solución de proteína añada unas gotas de reactivo acídico (ác. Tricloroacético, .ac. pícrico saturado).  Agregue NaOH diluido y observe el resultado a medida que sube el pH.